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系统性红斑狼疮（SLE）是一种复杂的自身免疫性疾病，生物标志物检测在SLE药物临床研究中具有重要意义，而流式检测技术以其高特异性、高灵敏度和多参数分析能力，在其中发挥着重要作用。
PART 01
生物标志物检测在SLE药物临床研究中的意义
辅助诊断与鉴别诊断
许多生物标志物可作为SLE诊断的依据，如抗dsDNA抗体、抗Sm抗体等，能帮助区分SLE与其他自身免疫性疾病。流式检测技术可准确检测这些标志物的表达水平，为临床诊断提供有力支持。
疾病活动度监测
生物标志物的水平常与SLE的疾病活动度密切相关。例如，抗dsDNA抗体和补体C3、C4水平的动态变化可反映SLE的活动状态。通过流式检测技术定期监测这些标志物，可及时了解疾病进展，为治疗方案的调整提供参考。
治疗效果评估
药物治疗后，生物标志物的变化可反映治疗效果。若治疗有效，抗dsDNA抗体滴度降低，补体水平升高；反之则可能治疗效果不佳或疾病复发。流式检测能快速、准确地检测这些变化，为临床医生提供及时反馈。
药物靶点发现与验证
随着对SLE发病机制的研究深入，新的生物标志物不断被发现，如细胞表面分子、细胞因子受体等。流式检测技术可对这些潜在靶点进行分析和验证，为新型药物的研发提供依据。
PART 02
基于流式检测的SLE生物标志物检测策略
细胞表面标志物检测
SLE 是由于过度活跃的免疫系统对外来刺激的反应过于激进，导致产生抗核抗体的 B 细胞和抗体反应增强的 T 细胞处于过度兴奋状态。
T细胞亚群分析
靶向 T 细胞治疗及 T 细胞功能亚群评估对 SLE 临床检测有重要意义，可检测 CD4+、CD8+ T 细胞的比例及活化状态等。例如，CD4+CD25+CD127+调节性T细胞的功能异常与SLE的发病相关。
图1 部分海外项目进展情况
图片参考：T Cells in Systemic Lupus Erythematosus, Rheum Dis Clin North Am. 2021 August ; 47(3): 379–393. doi:10.1016/j.rdc.2021.04.005.
B细胞亚群检测
B 细胞功能亚群分析在靶向 B 细胞的细胞治疗产品、抗体类药物中应用广泛，可检测 CD45、CD19、CD20、CD21、CD27、IgD、CD11c、CD38 等指标，分析 Naive、Memory、Switched memory、DN2、Plasma、Age-associated B、Active naïve 等 B 细胞亚群，检测在SLE患者中的变化。
图2 B细胞分型
图片参考：Challenges and Opportunities for Consistent Classification of Human B Cell and Plasma Cell Populations. Front. Immunol. 10:2458.
活化/抑制标志物检测
如CD86、CD40、PD-1/PD-L1等表面分子的表达水平，可反映免疫细胞活化状态或药物对免疫检查点的调控作用。
PART 03
流式检测策略的设计与优化
样本选择与处理标准化
（1）样本类型：以外周血为主，采集新鲜血液进行检测。
（2）标准化流程：需统一样本采集时间、抗凝剂（如EDTA vs.肝素）、保存条件及染色步骤，确保数据可比性。
标志物组合的多参数设计
（1）核心标志物组合：
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T细胞谱系：CD3/CD4/CD8/CD25/CD127（鉴定Treg等）。
图3 分群效果示意图
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B细胞谱系：CD19/CD20/CD27/CD38/IgD（区分初始B细胞、记忆B细胞、浆母细胞）。
图4 分群效果示意图
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功能性标志物：Ki-67（增殖）、CD69（早期活化）、CD138（浆细胞）。
图5 分群效果示意图
（2）创新性标志物拓展：
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如磷酸化蛋白（pSTAT1/3/5）、线粒体膜电位（评估细胞代谢状态）、胞内细胞因子（IFN-α、IL-6）等。
动态监测与时间点设计
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关键时间节点：基线、给药后早期（24h-1周，捕捉急性效应）、治疗中期（3-6个月，评估持续作用）及长期随访（安全性监测）。
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药效动力学（PD）分析：结合药物浓度（PK）数据，建立暴露-效应关系模型。
数据分析与生物信息学整合
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多维数据降维：采用t-SNE、UMAP等算法可视化高维流式数据，识别新型细胞亚群。
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与多组学数据关联：整合转录组（如IFN特征基因）、蛋白质组（血清细胞因子）数据、BCR测序数据等构建复合生物标志物模型。
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检测CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD16、CD56、CD14（TBMNK），绝对计数和百分比，稳定性RT&2-8℃ 14天
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检测CD45、CD3、CD4、CD8、CD16、CD56、CD19（TBNK），绝对计数和百分比，稳定性RT&2-8℃ 29天
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检测CD45、CD3、CD4、CD8、CD16、CD56、CD19（TBNK），冻存全血，绝对计数和百分比，稳定性-70℃ 12个月
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检测CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD20（TB），绝对计数和百分比，稳定性RT 14天
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检测CD45、 CD3、CD4、CD8（T），绝对计数和百分比，普通采血管，稳定性RT&2-8℃ 7天
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检测CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD16、CD56、CD14、CD25、CD127、CD69等 (TBNK、Treg、单核及活化指标CD69)，绝对计数和百分比，稳定性RT&2-8℃ 12天
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检测CD3、CD4、CD8、CD16、CD56、Ki67等 (Ki67)，-70℃冻存稳定性12个月
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检测CD45、CD19、CD20、CD21、CD27、IgD、CD11c、CD38（B细胞功能亚群，验证中）
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检测CD3 、CD4、CD8、IFN-γ、 IL-2、TNF-α、CD40L，PBMC冻存稳定性12个月
