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前言
近来CD276作为抗肿瘤生物药物的新兴靶点，吸引了广泛的关注，这里我们总结梳理了CD276的背景知识，并开发了相应的免疫组化检测方法，给大家做一个简要的介绍。
CD276简介
CD276，又名B7-H3，是免疫调节蛋白B7家族的膜蛋白成员。B7-H3在免疫系统中具有双重作用，是一种新的免疫检查点，其在肿瘤的发生发展中也起到了重要的作用，如促进肿瘤的迁移和侵袭，抗凋亡，促进细胞活力，化疗耐药性，上皮间质转化等。
B7家族及其功能
CD276基因
CD276基因定位于15号染色体，包含7个外显子和6个内含子，编码316个氨基酸[1]。 人类CD276蛋白有两种剪接异构体，分别为2IgB7H3和4IgB7H3。区别在于后者的胞外区为2个IgV、IgC的串联重复结构。2IgB7H3存在膜上和可溶性两种形式而4IgB7-H3由于无法被裂解而只有存在于膜上[2]。熙宁生物CD276抗体识别位点位于胞外区V1段，可同时识别CD276基因翻译的两个蛋白。
人类CD276结构示意图[3]
CD276的表达与肿瘤发生发展的关系
多项研究证实，CD276在大多数正常组织中低表达，但在多种肿瘤组织中过表达。这使其成为一个非常有潜力的免疫治疗靶点。
B7-H3在正常组织和部分肿瘤中的表达示例
B7-H3在各种人类实体瘤中的表达
CD276在肿瘤的发生发展中起到了重要的作用
CD276作为T细胞抑制分子来促进肿瘤的增殖和浸润（尽管其早前被报导也可作为T细胞激活分子），其表达上调可促进肿瘤细胞的免疫逃逸，同时减少IFN-γ , TNF-α及其他细胞因子的分泌。有研究报导，CD276可促进肿瘤细胞对葡萄糖的摄取以及无氧条件下的糖酵解，也参与肿瘤细胞的转移。针对肝癌的研究表明，CD276促进了癌细胞的EMT转化，多项研究显示CD276在肿瘤血管内皮细胞上表达，参与肿瘤血管生成，且不会在正常血管中表达[4]。
CD276的表达与患者预后
癌症患者中更高水平的CD276表达往往与预后不良相关[2,5]。Mao等在128例非小细胞肺癌中评估了CD276表达与临床病理参数及预后的关系。免疫组化染色结果显示CD276在肿瘤细胞的胞膜和胞浆中表达，它的表达与淋巴结转移、更高级别的TNM分期有关。共表达B7-H1和B7-H3（即CD276）的患者往往预后更差[6]。Yang等在一项56例接受一线EGFR激酶抑制剂治疗的高级别肺腺癌研究中，通过免疫组化的方法检测CD276的表达并对染色强度和阳性肿瘤细胞百分比进行了统计分析，结果显示CD276的高表达与更短的PFS（无进展生存期）和OS（总生存期）显著相关[7]。而Jung Hee Lee等针对透明细胞肾细胞癌的研究也表明CD276的表达与更短的PFS相关，说明CD276可作为透明细胞肾细胞癌独立的预后指标[8]。
乳腺癌、卵巢癌、肺鳞癌、肝细胞癌及胃腺癌中，
CD276高表达与预后不良相关[5]
CD276相关药物研究进展
目前以CD276为靶点的在研药物已超40个，涉及单抗、双抗、ADC、CAR-T等各个领域（如下图所示）。
CD276靶点相关部分临床试验
MacroGenics开发的Enoblituzumab(MGA271)是一款人源化的抗CD276单抗，通过Fab端结合肿瘤细胞同时Fc端结合如NK细胞、单核巨噬细胞、中性粒细胞等效应细胞，触发效应细胞杀伤靶细胞从而发挥抗肿瘤功能。I期临床试验显示该药物具有很好的耐受性，在恶性黑色素瘤、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、肾透明细胞癌等多肿瘤类型中观察到大于12周的疾病稳定期和2%-69%的肿瘤缩小。在一项前列腺癌的II期新辅助治疗试验中，接受enoblituzumab用药的患者相比未用药的显示出CD8阳性T细胞显著增加[9]。
第一三共的DS-7300是将CD276特异的单抗与DNA拓扑异构酶I抑制剂偶连的ADC药物，在一项针对高级别实体瘤患者的I/II期研究中显示出较好的药物耐受性及抗肿瘤效果，另一项针对经治的广泛期小细胞肺癌的II期临床试验正在进行中。
MacroGenics公司的另一款药物Orlotamab是一种靶向CD276和CD3的双抗，通过促使T细胞重新定位来杀死CD276表达的肿瘤细胞。而由于一些安全原因，Orlotamab被FDA终止了研究[10]。
而在众多药物中，靶向CD276的CAR-T细胞疗法占据了半壁江山。如博生吉医药的TAA06注射液，已于去年获得了FDA授予的孤儿药资格认定，其针对复发/难治神经母细胞瘤的国内I期临床目前正在进行中。
CD276免疫组化检测方法简介
熙宁生物 | 精翰生物免疫组化实验室已建立了成熟的CD276染色方法与判读体系，适用肺癌、肠癌、食管癌等多个癌种，可快速用于CD276相关药物开发过程中的入组检测、探索性生物标志物检测等。
CD276染色等级示意图
（来自熙宁生物|精翰生物IHC实验室）
肺癌
结直肠癌
食管癌
CD276在不同肿瘤上的染色
（熙宁生物 | 精翰生物免疫组化实验室）
熙宁生物免疫组化实验室
熙宁生物免疫组化实验室拥有BenchMark Ultra，Dako Autostainer Link 48等国际公认的免疫组化染色平台，遵从CAP和GCP体系要求，按照“合规，精准，伴随诊断”的理念，成功完成包括PD-L1、Claudin18.2、dMMR、TIM-3、TROP-2、AR等近200种靶标的免疫组化方法开发（部分结果如下图所示），多种方法已获得国内外权威机构的认可。
熙宁生物免疫组化实验室（精翰生物）室间质评合格证书
GPC3
MAGE-A4
DLL3
CD276
NY-ESO-1
MSLN
PRAME
PD-1
CEACAM5
CD70
扁桃体
卵巢癌
扁桃体
结直肠癌
肾细胞癌
c-MET
AR
CCNE1
HIF-1a
p-SMAD2
肺癌
乳腺癌
卵巢癌
乳腺癌
肠癌
ATM
γ-H2A.X
STING
EZH2
pRb
卵巢癌
乳腺癌
卵巢癌
淋巴瘤
肠癌
CD39
CD73
Nectin-2
Nectin-4
TGF-beta
肠癌
扁桃体
睾丸
乳腺癌
肺癌
CK5
CK7
PVR
OX40
EpCAM
扁桃体
乳腺癌
胎盘
结肠癌
肾脏
对于客户的伴随诊断需求，我们筛选出了多株具有伴随诊断开发价值的单克隆抗体并完成了前期的试剂盒开发。可随时为广大药企客户提供抗体筛选，方法学开发，样品检测，伴随诊断试剂盒开发等服务，欢迎致电咨询。
参考文献
