胞内因子检测
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        随着研究的进展,仅仅对细胞进行定量和活性的检测已不能满足需要。在单细胞水平研究细胞因子的表达能力对研究细胞因子在疾病中的作用越来越重要。因为自然状态下,T淋巴细胞产生少量的细胞因子,通常要对T淋巴细胞体外活化进行研究。在体外刺激过程中,T淋巴细胞产生的细胞因子已释放出来,胞内细胞因子信号较弱,难以进行检测。近来,采用PMA与 Ionomycin等药物刺激,用Brefeldin A (BFA)或者Monensin阻断胞内高尔基体介导的转运,使得细胞因子聚集和蓄积,以增强细胞因子信号可被流式细胞仪检测。 多参数流式细胞术可检测单个细胞内多个细胞因子,并可区分表达特定细胞因子的细胞亚群。胞内细胞因子流式分析法是用抗细胞因子抗体与细胞表面或胞内特定亚群标志物组合,即可检测不同细胞亚群细胞因子的分泌,同时采用特殊的化学试剂,荧光素与抗体选择,确保无细胞因子分泌细胞的最小荧光背景。具有其它方法难以比拟的优点: 效率高:可以在同一个细胞内同时检测两种或更多种细胞因子,也可根据细胞免疫表型区分分泌细胞因子的细胞的亚型,进行多参数相关分析; 简便:可以用全血分析,也可以使用分离的PBMCs; 普遍适用:可以使用新鲜的样品,也可以使用冻存的样品。




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